作业帮求推荐克隆载体和表达载体本人有一水稻与抗旱相关的目的基因的mRNA完整序列,想将其编码框转到拟南芥中表达,看看该基因能否提高拟南芥的抗旱能力,求教各位大神推荐下克隆载体和表达载
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/04 18:40:52
求推荐克隆载体和表达载体本人有一水稻与抗旱相关的目的基因的mRNA完整序列,想将其编码框转到拟南芥中表达,看看该基因能否提高拟南芥的抗旱能力,求教各位大神推荐下克隆载体和表达载
求推荐克隆载体和表达载体
本人有一水稻与抗旱相关的目的基因的mRNA完整序列,想将其编码框转到拟南芥中表达,看看该基因能否提高拟南芥的抗旱能力,求教各位大神推荐下克隆载体和表达载体.另外表达载体上需不需要有强启动子（比如35S）?我只看基因转进去有没有提高拟南芥的抗旱性.本来打算用pCAMBIA系列做表达载体的.
求推荐克隆载体和表达载体本人有一水稻与抗旱相关的目的基因的mRNA完整序列,想将其编码框转到拟南芥中表达,看看该基因能否提高拟南芥的抗旱能力,求教各位大神推荐下克隆载体和表达载
可以这样做：
根据目的序列设计引物,5' 引物、3' 引物加酶切位点,PCR产物连接pGEM-T Easy载体,构建目的基因克隆载体.pGEM-T Easy不知现在还有没有卖的,有点贵,但成功率很高.
分别对pCAMBIA 1301和pBI 121双酶切,将pBI 121 gusA编码序列连同CaMV35S启动子和nos终止子片段反向插入pCAMBIA 1301多克隆位点,构建带有GUS载体.
选适当的酶酶切自己构建的带有GUS的载体和目的基因CDS,构建中间载体,将中间载体CaMV35S启动子- 目的基因CDS-nos终止子插入片段进行测序验证,这个35S启动子来自pBI 121,目的基因CDS替换了来自pBI 121中的gusA编码序列.至此,构建的双元载体中共有3个CaMV35S启动子,分别启动pCAMBIA 1301中gusA、hpt II和插入的目的基因CDS.
然后转根癌农杆菌感受态细胞,拟南芥蘸花转化,用潮霉素筛选,高的是转化植株,GUS染色确认,后续抗旱性验证.
我想这个过程包含了你提到的几个问题,酶的选择根据目的基因序列,用软件分析一下来确定.这是个真实的实验,希望能提供参考.
本人觉得PBI121比较好用。