作业帮蛋白定量分析如何对待检测的蛋白进行定量分析?另外,mRNA DNA,如何进行定量分析啊?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/04 09:25:55
蛋白定量分析如何对待检测的蛋白进行定量分析?另外,mRNA DNA,如何进行定量分析啊?
蛋白定量分析
如何对待检测的蛋白进行定量分析?另外,mRNA DNA,如何进行定量分析啊?
蛋白定量分析如何对待检测的蛋白进行定量分析?另外,mRNA DNA,如何进行定量分析啊?
蛋白质的定量定主要有直接紫外吸收法、Bradford法和Lorry法三种.
蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,所以任何一个蛋白质都具有280nm附近的紫外吸收峰,在此波长范围内,蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系.
改良的Bradford法,蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合,在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量.
Lorry法.蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展,从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应,产生蓝色,在一定浓度范围内,其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比,由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同,因此在测定时需使用同种蛋白质作标准.
总RNA和DNA都可以用紫外分光光度计在260nm和280nm处测定吸光度值进行浓度换算,dsDNA换算系数为50,RNA为40,oligoDNA20,ssDNA约为37.此外260nm/280nm的比值还可以反映出RNA和DNA的纯度.RNA比值应在2.0而DNA在1.8左右
mRNA的定量需要借助其他生物方法,现在最常用的就是qPCR,就是定量PCR.其中有最常用的是real-time PCR 这种方法可以相对定量或者绝对定量出mRNA的表达水平.
中国药典推荐的方法是Lorry法。蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，产生蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。
美国fda药典推荐的是Bradford法，蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合，在一...
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中国药典推荐的方法是Lorry法。蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，产生蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。
美国fda药典推荐的是Bradford法，蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。
两者大多数情况下是都能给较为精确的对蛋白质定量。
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蛋白定量分析，现在都有很多的现成的试剂盒，像bradford蛋白定量试剂盒，BCA蛋白定量试剂盒等等。很简单按说明书来就行。我用过北京创根胜泰的BCA挺方便的。